HEPES是兩性離子有機化學緩沖劑，屬于二十個 Good 的緩沖區(qū)之一，它不與金屬離子結合，極易溶于水。經常被添加到細胞培養(yǎng)基中使用。雖然它對細胞沒有營養(yǎng)，但是在細胞培養(yǎng)需要在 CO2 培養(yǎng)箱外進行長時間操作時，添加 10–25 mm HEPES 可提供額外的緩沖能力孵化器為細胞提供一個良好的PH環(huán)境。

HEPES 緩沖區(qū)具有以下特征：

1、HEPES 的 pKa 取決于溫度：例如①在 25oC：pKa= 7.48 ②在 37oC：pKa= 7.31

2、在水溶液中有良好的溶解性，水溶液無色透明；

3、化學性質穩(wěn)定，對生物沒有毒性且對生物膜無明顯的滲透作用：

4、對紫外波無特征吸收，在波長小于230-240nm時才有微弱的吸收，因而不干擾通常的光度法測量。

5、不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度

HEPES除了在細胞培養(yǎng)基中的使用之外在其他生物研究中，也占有非常重要的地位，因為它不與金屬離子結合，所以在很多金屬離子研究中都可以使用它，它是三羥氨基甲烷與磷酸鹽的良好替代品。HEPES 也是電子顯微鏡中蛋白質沉積技術的常用緩沖液，因為它不會影響金屬基材。經過評估并證明HEPES適合與兩性化合物一起使用，為等電聚焦應用產生小于 1 個 pH 單位寬的 pH 梯度。在谷氨酸結合試驗的推薦緩沖液中，HEPES也是作為緩沖液，因為它可以防止與非受體材料結合。

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