電泳技術(shù),作為分子生物學(xué)研究中的核心分析方法,發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。電泳主要可分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類別。自由界面電泳,如等電聚焦電泳、等速電泳等,雖曾廣泛使用,但目前已較少見。相比之下,區(qū)帶電泳則更為常用,它依賴于各種類型的支持物,如濾紙、醋酸纖維薄膜等,其中瓊脂糖凝膠電泳在分子生物學(xué)領(lǐng)域中尤為受歡迎。
電泳的本質(zhì)在于帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移。由于不同物質(zhì)所帶電荷及分子量各異,它們?cè)陔妶?chǎng)中的移動(dòng)速度亦會(huì)有所不同。正是基于這一特性,電泳技術(shù)被廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的定性、定量分析,以及混合物的組份分析和單個(gè)組份的提取制備。這一技術(shù)不僅在臨床檢驗(yàn)中占據(jù)重要地位,也為實(shí)驗(yàn)研究提供了強(qiáng)有力的支持。
01、1.電泳技術(shù)簡(jiǎn)介
1.1 ▍ 電泳的操作流程
在進(jìn)行電泳前,務(wù)必使用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端進(jìn)行正確聯(lián)接,并確保極性無(wú)誤。
開啟電泳儀電源前,應(yīng)將電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,并將電壓旋鈕轉(zhuǎn)至小。根據(jù)實(shí)際工作需求,選擇合適的穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
一切準(zhǔn)備就緒后,方可接通電源。隨后,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕,逐漸增加電壓至所需水平,并設(shè)定電泳的終止時(shí)間。至此,電泳過程即正式啟動(dòng)。
電泳結(jié)束后,務(wù)必將各旋鈕、開關(guān)調(diào)回零位或關(guān)閉狀態(tài),同時(shí)拔出電泳插頭,以確保設(shè)備。
02、電泳操作注意事項(xiàng)
在操作過程中,需保持謹(jǐn)慎,確保各項(xiàng)步驟的準(zhǔn)確性,以保證電泳結(jié)果的可靠性。同時(shí),也要注意設(shè)備的使用,遵循操作規(guī)程,避免因操作不當(dāng)而導(dǎo)致的設(shè)備損壞或人員傷害。
當(dāng)總電流在儀器額定電流范圍內(nèi)時(shí),允許進(jìn)行多槽關(guān)聯(lián)操作,但必須確保不超過電流限制,以防止對(duì)儀器壽命產(chǎn)生不良影響。
在電泳儀通電工作期間,應(yīng)避免人體與電極、電泳物或其他可能帶電的部分直接接觸。若需在電泳槽內(nèi)取放物品,務(wù)必先切斷電源,以確保。此外,儀器應(yīng)良好接地,以防止漏電事故的發(fā)生。
在某些特定情況下,需要檢查儀器的電泳輸入時(shí),可以在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載啟動(dòng),但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開機(jī),以防止電壓表指針劇烈跳動(dòng),從而避免不必要的儀器損壞。
儀器通電后,請(qǐng)勿臨時(shí)增加或拔除輸出導(dǎo)線插頭,以防止短路事故的發(fā)生。盡管儀器內(nèi)部設(shè)有保險(xiǎn)絲,但短路仍可能造成儀器損壞。
若在使用過程中發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,例如噪音增大、放電或異常氣味,應(yīng)立即切斷電源并檢修,以確保。
由于不同介質(zhì)支持物的電阻值有所差異,因此在電泳過程中,通過的電流量、泳動(dòng)速度以及到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間都會(huì)有所不同。因此,不建議在同一電泳儀上同時(shí)進(jìn)行不同介質(zhì)支持物的電泳。
03、常見問題與解答
電泳儀輸出未達(dá)到設(shè)定值時(shí)的處理方法:
電泳儀的輸出遵循歐姆定律,即電壓U等于電流I與電泳槽電阻R的乘積。在電阻R相對(duì)穩(wěn)定的情況下,若U、I或功率P(P=I×U)中的任何一個(gè)參數(shù)保持恒定,其他參數(shù)也將隨之恒定;而當(dāng)任何一個(gè)參數(shù)發(fā)生變化時(shí),其他參數(shù)也會(huì)成正比地變化。
若電泳儀的輸出電壓U無(wú)法達(dá)到預(yù)設(shè)值,應(yīng)首先觀察I或P是否已恒定,或是否已達(dá)到電泳儀的I或P限制(JY電泳儀具有明確的指示燈提示)。若未達(dá)到極限值,可嘗試增加已恒定的I或P設(shè)置(如有必要可至極限值),以提高電壓輸出。
若電流I無(wú)法達(dá)到預(yù)設(shè)值,則可調(diào)整電壓U或功率P。若功率P無(wú)法達(dá)到預(yù)設(shè)值,同樣可調(diào)整電壓U或電流I。
電腦控制電泳儀過壓報(bào)警的可能原因包括空載使用、電泳槽未加緩沖液或鉑金絲斷裂。過流保護(hù)則可能由于電泳槽短路、緩沖液選擇錯(cuò)誤或輸出接口液體濺入等原因觸發(fā)。此外,漏電保護(hù)可能由于儀器內(nèi)部液體濺入、灰塵落入或保險(xiǎn)管損壞等原因啟動(dòng)。若儀器無(wú)輸出,需檢查保險(xiǎn)管是否完好、輸出座與主板連接是否脫落以及瓷罐變壓器插頭是否脫落或用萬(wàn)用表檢查每組兩端是否通路。